PRACTICA 2: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO EN PLACA O TUBO

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO EN PLACA O TUBO

OBEJTIVO

• Balanza
• Vidrio de reloj o papel de aluminio
• Espátula
• Agua destilada
• Probeta, pipeta
• Matraz Erlenmeyer con tapón
• Placa calefactora agitadora
• Imán, varilla recoge imanes
• Medios de cultivo deshidratados 
• Agua destilada, mechero bunsen, 
• Autoclave
• Placas de Petri y tubos de ensayo con tapones.
  
   
  PREPARACIÓN DE UN MEDIOS SÓLIDO EN PLACA

 Pesar la cantidad correspondiente de  medio de  cultivo, de acuerdo con los  cálculos realizados, y  rehidratarlo con la cantidad adecuada de agua  destilada. En el bote del medio nutritivo que vamos a preparar nos lo especifica:  en 1000 ml poner 40 gr 
Nosotros queremos preparar 250 ml por lo que pesamos 10gr de el medio.

Preparamos el agua destinada y el medio

Añadirlo todo al matraz, lo tapamos  y calentar en la placa calefactora a 80ºC con el imán dentro para que no deje de moverse. Tenemos que observar que se vuelve transparente y pararlo cuando vaya a empezar a hervir.

El siguiente paso es esterilizar los medios, antes de dispensarlos en las placas. Se deben envolver en papel de aluminio, para evitar posibles fugas, pero nosotros lo ponemos con doble bolsa porque no había papel de aluminio.

Tapamos el matraz pero no cerrado completamente, porque podría romperse. Esterilizamos a 121ºC durante 15 minutos. Una vez transcurrido ese tiempo, los sacamos y cerramos el tapón para que nose contaminen. Los dejamos enfriar, sobre los 45-50ºC, porque al enfriarse se ira solidificando y si esto ocurre no podremos ponerlo en las placas. 

Cogemos las placas estériles cerca de la llama del mechero bunsen, para mantener la esterilización, y distribuimos el medio. El procedimiento es:

• Destapar el matraz
• Flamear bien la boca del matraz con el mechero
  
• Levantar la tapa de la placa de Petri estéril, solamente lo necesario para permitir la entrada del cuello de matraz y poder vaciar el agar, e inmediatamente tapar la placa. Es necesario mover la placa para que el medio se distribuya uniformemente.
• Flamear la boca del matraz y taparlo.
• Repetir este proceso con todas las placas o hasta que se acabe el medio.

Dejar que solidifique el medio y girar la placa.

 



PREPARACIÓN DE MEDIO SÓLIDO EN TUBO (SLANT)
Seguimos los mismo pasos para preparar el medio de cultivo, porque es el mismo que hemos usado antes  (TSA).
La diferencia es que el medio se esteriliza en los tubos de ensayo, no como en placa que se esteriliza en el matraz y despues se distribuye por las placas. 
Una vez que en la placa calefactora y agitadora, tenemos en medio transparente, lo retiramos y lo dispensamos en los tubos, antes de que se enfrie y se solidifique.

Una ves que tenemos todos los tubos llenos a un tercio de su capacidad, los tapamos con sus correspondiente tampones. Los metemos en el autoclave a 121ºC durante 15 minutos. 

Una vez autoclavados, debemos dejamos enfriar en posición inclinada, para que solidifiquen en esa posición y obtengamos un medio en pico de flauta o en Slant.