PRACTICA 9: PRUEBAS BIOQUIMICAS
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
CATALASA
La catalasa es una enzima, propia de las bacterias anaerobias facultativas, que descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno, que se desprende en forma de burbujas
2H2O2 2H2O + O2
De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares.
Se utiliza para diferenciar el género Staphylococcus y Micrococcus (catalasa +) del género Streptococcus (catalasa -).
PROCEDIMIENTO
Sobre un portaobjetos se deposita una colonia de 24 h., se añade una gota de H2O2 al 3%, sin mezclar con el asa y sin invertir el orden.
El inmediato desprendimiento de burbujas se considera una prueba positiva.
Las colonias se deben tomar de un medio sin sangre ya que los eritrocitos tienen actividad de catalasa y pueden falsear los resultados.
Esta prueba también puede realizarse en tubo.
OXIDO FERMENTACIÓN
Estudia la capacidad de los microorganismos para oxidar y/o fermentar la glucosa produciendo ácido, que se detecta por la presencia de un indicador de pH (azul de bromotimol), que vira de color verde a amarillo.
Con esta técnica podemos diferenciar el microorganismo cocos Gram (+) entre sí.
También nos ayuda a diferencia Pseudomonas y Enterobacterias de otros bacilos Gram (-).
PROCEDIMIENTO
Se siembra la muestra, en picadura, en dos tubos que contienen el medio de Hugh Leifson (O/F) adicionado de un 1% glucosa.
A uno de los tubos se añade parafina líquida estéril para conseguir anaerobiosis.Se incuban durante 24 -48 horas a 37 º C.
Este técnica es muy utilizada para diferencia S. aureus del resto de los estafilococos.
Ha mi grupo no nos crece microorganismo, por lo que sembramos no eran S. Aureus. A otro grupo si los salio.
Otros géneros como Serratia y Bacillus también dan positiva esta prueba.
PROCEDIMIENTO
En una placa que contiene Agar DNAsa, se siembra la muestra, haciendo una estría de unos 2 cm.
Se incuba 24horas /37ºC.
Se hace la lectura añadiendo ácido HCl 1 N (que precipita el DNA), o azul de toluidina al 1%, y observando la aparición de zonas claras o coloreadas de rosa, respectivamente, alrededor de la zona sembrada.
COAGULASA
Estudia la capacidad del microorganismo para producir el enzima coagulasa que origina la coagulación del plasma humano o de conejo.
Con esta técnica diferenciamos S. aureus (coagulasa +) de los otros Staphylococcus (coagulasa -)
PROCEDIMIENTO
Se puede hacer en porta y en tubo
En tubo: Se emulsionan bastantes colonias en un tubo de ensayo con 0,5ml de plasma citratado. Se incuba a 37º C y se observa la formación del coágulo a las 4 horas. Si es negativo se reincuba toda la noche y se procede a su lectura a las 18 –24horas.
RESULTADOS
Se observa la formación de un coágulo total o parcial cuando la prueba es positiva.
SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA
Algunas especies del género Staphylococcus son resistentes a la novobiocina.
Con esta técnica se diferencian S.saprophyticus (resistente a la novobiocina) de los demás estafilococos coagulasa negativos.
PROCEDIMIENTO
Se siembra haciendo estrías sobre un cuadrante.
Después se coloca, en el centro de la zona sembrada, con unas pinzas estériles, un disco de novobiocina.
Se añade una gota de agua destilada estéril para aumentas la adhesión. Se incuba la placa invertida durante 24 horas a 37ºC.
RESULTADO
Sensible: Halo de inhibición alrededor del disco de Novobiocina.
Resistente: Hay crecimiento alrededor del disco.
CATALASA
La catalasa es una enzima, propia de las bacterias anaerobias facultativas, que descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno, que se desprende en forma de burbujas
2H2O2 2H2O + O2
De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares.
Se utiliza para diferenciar el género Staphylococcus y Micrococcus (catalasa +) del género Streptococcus (catalasa -).
PROCEDIMIENTO
Sobre un portaobjetos se deposita una colonia de 24 h., se añade una gota de H2O2 al 3%, sin mezclar con el asa y sin invertir el orden.
El inmediato desprendimiento de burbujas se considera una prueba positiva.
Las colonias se deben tomar de un medio sin sangre ya que los eritrocitos tienen actividad de catalasa y pueden falsear los resultados.
Esta prueba también puede realizarse en tubo.
OXIDO FERMENTACIÓN
Estudia la capacidad de los microorganismos para oxidar y/o fermentar la glucosa produciendo ácido, que se detecta por la presencia de un indicador de pH (azul de bromotimol), que vira de color verde a amarillo.
Con esta técnica podemos diferenciar el microorganismo cocos Gram (+) entre sí.
También nos ayuda a diferencia Pseudomonas y Enterobacterias de otros bacilos Gram (-).
PROCEDIMIENTO
Se siembra la muestra, en picadura, en dos tubos que contienen el medio de Hugh Leifson (O/F) adicionado de un 1% glucosa.
A uno de los tubos se añade parafina líquida estéril para conseguir anaerobiosis.Se incuban durante 24 -48 horas a 37 º C.
RESULTADOS
Esta es la tabla para observar los resultado, en nuestra practica nos salió que era fermentativo, los dos amarillo.
FERMENTACIÓN DEL MANITOL
Estudia la capacidad de los microorganismos para fermentar el manitol y crecer en presencia de una elevada concentración de NaCl (Medio de Chapman)
Cuando el microorganismo fermenta el manitol se producen metabolitos ácidos que cambian el pH del medio y el indicador (rojo fenol) vira a amarillo.Este técnica es muy utilizada para diferencia S. aureus del resto de los estafilococos.
PROCEDIMIENTO
Realizamos una siembra de un microorganismo para determinar si es S. Auerus
Ha mi grupo no nos crece microorganismo, por lo que sembramos no eran S. Aureus. A otro grupo si los salio.
DNAsa
Estudia la capacidad que tienen algunas bacterias para producir el enzima DNAsa, que produce la degradación del DNA que contiene el medio de cultivo.
Con esta técnica diferenciamos las especies patógenas de Staphylococcus (DNAsa +) de las no patógenas (DNAsa -).Otros géneros como Serratia y Bacillus también dan positiva esta prueba.
PROCEDIMIENTO
En una placa que contiene Agar DNAsa, se siembra la muestra, haciendo una estría de unos 2 cm.
Se incuba 24horas /37ºC.
Se hace la lectura añadiendo ácido HCl 1 N (que precipita el DNA), o azul de toluidina al 1%, y observando la aparición de zonas claras o coloreadas de rosa, respectivamente, alrededor de la zona sembrada.
COAGULASA
Estudia la capacidad del microorganismo para producir el enzima coagulasa que origina la coagulación del plasma humano o de conejo.
Con esta técnica diferenciamos S. aureus (coagulasa +) de los otros Staphylococcus (coagulasa -)
PROCEDIMIENTO
Se puede hacer en porta y en tubo
En tubo: Se emulsionan bastantes colonias en un tubo de ensayo con 0,5ml de plasma citratado. Se incuba a 37º C y se observa la formación del coágulo a las 4 horas. Si es negativo se reincuba toda la noche y se procede a su lectura a las 18 –24horas.
RESULTADOS
Se observa la formación de un coágulo total o parcial cuando la prueba es positiva.
SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA
Algunas especies del género Staphylococcus son resistentes a la novobiocina.
Con esta técnica se diferencian S.saprophyticus (resistente a la novobiocina) de los demás estafilococos coagulasa negativos.
PROCEDIMIENTO
Se siembra haciendo estrías sobre un cuadrante.
Después se coloca, en el centro de la zona sembrada, con unas pinzas estériles, un disco de novobiocina.
Se añade una gota de agua destilada estéril para aumentas la adhesión. Se incuba la placa invertida durante 24 horas a 37ºC.
RESULTADO
Sensible: Halo de inhibición alrededor del disco de Novobiocina.
Resistente: Hay crecimiento alrededor del disco.
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