PRACTICA 13: API E


FUNDAMENTO

Es un sistema estandarizado que permite la identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos Gram negativos no exigentes, que incluye 21 tests bioquímicos miniaturizados, así como una base de datos. La lista completa de las bacterias posibles de identificar con este sistema se presenta en la Tabla de Identificación al final de la presente ficha técnica. 

Se compone de 20 microtubos que contienen los substratos deshidratados. Los microtubos se inoculan con una suspensión bacteriana que reconstituye los tests. Las reacciones producidas durante el periodo de incubación se traducen en cambios de color espontáneos o revelados mediante la adición de reactivos. La lectura de estas reacciones se lleva a cabo utilizando la Tabla de Lectura, y la identificación se obtiene con la ayuda del Catálogo Analítico o del software de identificación.


PROCEDIMIENTO


Preparamos una suspensión bacteriana. Para ello tomamos una colonia aislada de microorganismos y la resuspendemos homogéneamente en 5 mL de SSE. Se debe utilizar inmediatamente.

Sembramos la galería API. Introducimos la suspensión en los tubos de la galería con una pipeta. La punta de la pipeta debe estar apoyada sobre la pared de la cúpula inclinando ligeramente la cámara hacia delante.

En los pocillos de ADH, LDC, ODC, H2S y URE se debe crear una atmósfera anaerobia llenando la cúpula con aceite de parafina En los pocillos de CIT, VP y GEL debemos llenas la cúpula y el tubo con la suspensión bacteriana. Para el resto únicamente llenamos los tubos.

 

Ponemos agua destilada en la cámara húmeda para proporcionar una atmósfera húmeda durante la incubación

Colocamos encima la tira de API e incubamos a 37ºC
Tras la incubación, añadimos reactivos a los tubos que lo requieran y observamos resultados.
RESULTADOS
Debemos tener al menos tres resultados positivos, sino la prueba no será correcta. Hay pruebas que el resultado se consigue directamente y en otras que necesitan reactivos para revelarlas. A la prueba de TDA se debe añadir una gota de FeCl3 al 10%. Si cambia de color a marrón oscuro, el resultado es positivo.

 A la prueba VP, se debe añadir una gota de reactivo de 1 (KOH al 40%) y una gota de reactivo 2 (C2H5OH). Si cambia de color a rosa fuerte o rijo, el resultado es positivo, pasador 5-10 minutos
 A la prueba ONPG añadimos una gota de reactivos de Kovacs, si cambia a azul se considera la prueba positiva.


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